R5 - Obtención de formulaciones antivarroa que no generen residuos en productos derivados de la colmena. 

Para la determinación de posibles residuos en miel, cera y propóleo tras la aplicación de los tratamientos,  en las muestras analizadas se buscaron restos de los aceites esenciales empleados en el desarrollo de las formulaciones: mentol, carvacrol, timol, cineol y linalool. Tras el análisis de las muestras, se conlcuyo lo siguiente:

- Los residuos de timol se detectaron en el 80% de las muestras (excepto en las formulaciones que no lo incorporaban).

- En las colmenas tratadas con mentol y carvacrol, se detectaron residuos de ambos aceites esenciales en la miel, en un rango de 0,4-0,8 µg/kg y 0,5-0,96 µg/kg, respectivamente.

- No se detectaron residuos de ningún aceite esencial en las muestras de propóleo.

- No se detectaron niveles de residuos de linalool ni cineol.

Por lo tanto, se concluye que las pastas sólidas basadas en la formulación de mentol y carvacrol en un soporte biodegradable podrían constituir una alternativa viable para la prevención y control de la varroa en combinación con los acaricidas sintéticos y el buen manejo de las colmenas. 

R4 - Obtención de formulaciones antivarroa eficaces en condiciones reales de utilización. 

Los ensayos de eficacia consistieron en aplicar las formulaciones desarrolladas en las colmenas experimentales y evaluar la caída de ácaro varroa a lo largo del mes de duración del ensayo. Previamente, se analizó el vigor de cada una de las colmenas y se realizó un recuento de varroa (aplicando el mismo método que en los recuentos tras la aplicación). Por otro lado, también se evaluó la posible alteración del comportamiento de las abejas tras la aplicación del tratamiento y cómo reaccionaban ante él (propolización, limpieza, etc.). 

Los resultados del ensayo de campo presentaron gran variabilidad tanto entre colmenares como dentro de un mismo colmenar. La pasta resultó ser, en general, la formulación con mejores resultados y un mayor efecto acaricida. Sin embargo, se necesitan futuros estudios que permitan perfeccionar dicha formulación y abordar ensayos de campo que permitan confirmar la eficacia en condiciones de campo.

R3 - Obtención de formulaciones antivarroa no tóxicas para las abejas.

Se llevaron a cabo los ensayos de toxicidad tanto de los aceites esenciales como de algunas de las formulaciones a nivel de laboratorio en la Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. De estos ensayos se han podido extraer varias conclusiones: 

- La encapsulación protege de la toxicidad que presentan los aceites esenciales en estado puro. Posiblemente se deba a que éste se libera desde la microcápsula al medio exterior de forma gradual, a diferencia del contacto directo del aceite esencial puro.

- Cada una de las colonias sigue la misma tendencia de reducción del número de abejas vivas conforme avanzan los días del ensayo. Esta reducción es proporcional al porcentaje de abejas vivas encontradas en el primer día de experimento.

- De forma general, se observa una gran variabilidad, al tratarse de ensayos con animales vivos. No obstante, el comportamiento dentro de cada colonia y a lo largo del tiempo del ensayo es homogéneo. De hecho, la variabilidad en la mortalidad es incluso mayor dentro del grupo control por lo que parece un parámetro intrínseco de cada colonia. Esta observación, hecha anteriormente en otros ensayos preliminares, se intentó evitar recogiendo abejas de la misma colmena.

Por último, cabe destacar que no se observaron cambios de comportamiento en ninguna de las microcolonias utilizadas para estos experimentos.

R2 -  Detección y cuantificación inicial de residuos en la miel natural y otros productos derivados de la colmena (miel, cera y propóleo) en los colmenares a estudiar.

Se realizó el análisis de residuos de acaricidas en muestras de miel, cera y propóleo de los  colmenares experimentales de Galicia, Castilla y León, Castilla-La Mancha y Canarias. Dicho análisis se realizó mediante cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)acoplada a un espectrómetro de masas y se obtuvieron los valores de acaricidas presentes con anterioridad a los tratamientos obtenidos para cada colmenar.

Respecto a los resultados obtenidos en la determinación de residuos comerciales, cabe destacar la diferencia existente entre los valores obtenidos dependiendo del apicultor. Así, en las muestras correspondientes a los apicultores más dedicados a la apicultura ecológica, se obtuvieron valores de cero o muy por debajo de los límites permitidos. Con respecto al valor elevado de coumafós en las muestras de cera de panal viejo procedente de Viana do Bolo, el apicultor informó de que obtuvo resultados similares en analíticas anteriores, lo que demuestra la altísima persistencia de un acaricida empleado en su explotación hace aproximadamente 20 años. De forma general, se puede concluir que los resultados obtenidos con respecto a los acaricidas sintéticos, no constituyen una 

interferencia frente a los resultados que se obtuvieron posteriormente en cuanto a la eficacia antivarroa de las formulaciones desarrolladas en este trabajo.

R1 - Obtención y caracterización fármaco-técnica de una o varias formulaciones alternativas a los tratamientos convencionales. 

Se desarrollaron y optimizaron diferentes formulaciones en base a su caracterización galénica y a la información de los estudios preliminares. Así, la transformación de aceites esenciales como ingredientes activos en una forma farmacéutica adecuada para ser aplicada en una colmena, estable y que permitiera liberar el aceite esencial se llevó a cabo mediante la selección de los excipientes y vehículos más apropiados a este tipo de aplicación.

Concretamente, se desarrollaron un total de cuatro formulaciones para su potencial aplicación en el campo de la apicultura.

1. Formulaciones tipo microcápsula.

2. Formulaciones tipo gel a base de complejos de ciclodextrina.

3. Formulaciones tipo oleogel.

4. Formulaciones tipo pasta.

Cada una de las formulaciones fue paulatinamente mejorada en base al feedback recibido tanto por los investigadores como por los apicultores, en los distintos ensayos que se llevaron a cabo. Asimismo, todas las formulaciones fueron caracterizadas estableciendo para ello los parámetros idóneos para cada formulación.