Jornada presencial de divulgación con propietarios de monte alcornocal, empresas productoras de corcho y viveros de producción de planta forestal para contar los resultados del proyecto. Como resultado del proyecto se han puesto en contacto con el IMIDRA y se ha transferido el conocimiento obtenido mediante estancias de trabajadores en El Encín para su formación, empresas líderes en el sector como Agromillora (España), Deifil (Portugal), Amorim Cork (Portugal), Nogalnature (España), ... que usan actualmente los protocolos de multiplicación transferidos para el desarrollo de su propia producción de planta.

Establecimiento de banco clonal con los genotipos seleccionados y propagados en Madrid (Finca de El Encín IMIDRA. Alcalá de Henares. Comunidad de Madrid. España) y en Cádiz (La Almoraima. Castellar de la Frontera. Cádiz. Andalucía. España).                                           Se han plantado 3 individuos de cada uno de los genotipos seleccionados y este material será mantenido como banco clonal de individuos selectos disponible para su uso y estudio.

Transferencia de embriones a empresa del sector de la micropropagación vegetal de embriones de todos los genotipos tolerantes para desarrollar su propagación en masa y obtener planta.               Producción de planta de hasta  500pl/3genotipos en tarrinas.          Como recomendación práctica:                                                         1. la empresa consiguió obtener planta mediante micropropagación por yemas axilares de las plántulas otenidas al germinar in vitro los embriones somáticos.                                                                       2. cada empresa deberá adaptar los protocolos a sus condiciones de producción.                                       

Guía de inoculación y verificación de tolerancia de la planta producida.                                                                                      Se desarrollan varios protocolo de evaluación in vitro de resistencia en planta procedente de la embrigénesis somática que se contrasta con los resultados de la planta una vez desarrollada en maceta.  Se obtienen un protocolo de detección precoz de la sensibilidad de las plantas que puede adelantar los resultados de evaluación de los genotipos.

Guía de protocolo de micropropagación.                                        Guía publicada que describe el procedimiento para obtener planta en laboratorio con el mismo material genético de los árboles seleccionados, mediante la técnica de cultivo in vitro denominada EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA, por la que se obtienen embriones a partir  de hojas que se pueden convertir en planta. Este protocolo garantiza la captura del material genético del 99% de los alcornoques que se han realizado, pudiéndose crioconservar las líneas embriogénicas para su conservación y uso posterior. Se ha aplicado y obtenido líneas embriogénicas de 10 genotipos de Cádiz y 10 genotipos de Extremadura.Se han clonado 17 genotipos tolerantes.

Selección de 25 alcornoques tolerantes de Cádiz y 12 de Extremadura tras detectar la presencia de fitóftora en el suelo de sus raicillas.      Estos individuos son especialmente exclusivos y valiosos por confirmarse que han sobrevivido en focos de seca y tener una buena calidad de corcho.  Se pueden usar por su material genético plus en programas de mejora genética.

Guía de protocolo de selección: detección de fitóftora en muestras de suelo y raíz. Guía publicada para enseñar a seleccionar entre los candidatos a los individuos tolerantes. Se describe con detalle el protocolo para tomar muestras de suelo y raíz y para aislar, identificar y conservar aislados de P cinnamomi y Py spiculum. Se recomienda:   1. Tomar muestras de suelo y raiz de cada árbol candidato y de un árbol sintomático próximo. Realizar tres hoyos de 15-20 cm de profundidad a 1 m de distancia del tronco y extraer raicillas que  presenten algún tipo de lesión característico de podredumbre radical, como necrosis y descascarillamiento y recoger 500 g de suelo.    2.Para analizar las raicillas lavar con agua y lejía al 2% y secar. Sembrar fragmentos de 4-5 mm de longitud de raíces sintomáticas en medio selectivo CMA-NARPH e incubar durante 4-7 días a 22º C en oscuridad. Transferir las colonias a medio PDA, V8 o CA y tras  4-7 días con luz observar  características morfológicas y reproductivas.    3. Las muestras de suelo se secan y suspenden (100 g /500 mL) en agua desionizada y se dejan reposar. Se usan filodios de eucalipto limpios de 4-5 mm2 como cebos biológicos, que se colocan sobre la superficie. Tras 4 días a 22-25º C se lavan los cebos con agua estéril y se incuban en CMA-NARPH durante 5 días a 22º C en oscuridad.       Se detectaron en 21 de las 50 árboles candidatos de Cádiz seleccionados por ortofotos. 

Base de datos de árboles candidatos por su tolerancia a P. cinnamomi:  Fichas y fotos descriptivas de cada árbol, coordenadas, datos y contacto del propietario /gestor. Archivo de Fichas de cada árbol estudiado.                                                                                          Se ofrece una nueva base de datos con 50 árboles preseleccionados  de la zona de procedencia de Cádiz y 12 seleccionados por CICYTEX en Extremadura. Todos ellos con ficha, coordenadas y marcados en campo para su identificación. Util como material de base de programas de mejora genética en base a la calidad corchera y resistencia al patógeno y cambio climático.             

Guía de selección de árboles candidatos. Guía publicada que describe un procedimiento fácil y eficaz para identificar y seleccionar alcornoques por su tolerancia en focos de decaimiento po P cinnamomi y por su buena calidad de corcho.                                                     Ofrece un sistema fácil e intuitivo de mejora genética al seleccionar parentales de calidad corchera alta que han estado expuestos y sobrevivido al patógeno por un largo periodo de tiempo. Las principales recomendaciones:                                                                            1. Con las ortofotos más recientes se buscan pies de alcornoque completamente asintomáticos durante más de 10 años dentro de cada foco preseleccionado. Los pies candidatos deben estar en una posición central respecto a los sintomáticos. La determinación de la especie mediante fotointerpretación está sujeta a gran incertidumbre por lo que será necesario identificarlos in situ. La posición de los pies identificados será almacenada en una base de datos geográficos y su idoneidad será verificada en una visita de campo.                               2. Seleccionar árboles de diversas regiones de procedencia para captar más diversidad genética y mejorar la adaptabilidad de la población base seleccionada.                                                           3. La calidad del corcho de los candidatos se comprueba en cada individuo mediante análisis de su corcho al final de la maduración.                                                       4. Debe haber síntomas y mortalidad en el entorno del árbol candidato. 5. Confirmar la presencia del patógeno en in situ y la exposición del árbol a éste durante un tiempo superior al periodo de incubación de la enfermedad >10años.                                                                       6. Caracterizar e identificar el árbol candidato mediante el marcado in situ y el registro de su posición geográfica exacta.

 

Base de datos de focos de seca por fitóftora identificados y georeferenciados existentes a la fecha en dos grandes regiones corcheras de España: Cádiz-Andalucía y Extremadura.                                          Aporta datos actualizados del avance de la enfermedad en los últimos 10 años y el estado actual de la distribución del decaimeinto de las masas forestales causada por fitóftora cinnamomi en una gran extensión de terreno de dos habitats protegidos (dehesa y alcornocal) permitiendo tomar medidas sanitarias para prevenir su avance a las administraciones públicas y su tratamiento a nivel local por los propietarios.                                                           

Guía de deteccion de focos de decaimiento forestal por fitóftora. Guía publicada que describe un protocolo fácil y barato de aplicar mediante fototointerpretación de una serie temporal de imágenes aéreas. Se recomienda:                                                                                     1. Usar mapas de calidad de corcho de cada región empezando por aquellas zonas con alcornocales que presentan un índice de calidad de corcho superior a la media. Si no hay un mapa de calidad de corcho, se buscarán zonas en base a datos del plan de calas o de la red de rodales selectos de alcornoque.                                                         2. En cada zona  preseleccionda por la calidad de corcho, se comprobará mediante fotointerpretación, con la ayuda de la clave de interpretación del anexo 1 de la Guía, que la masa presenta los síntomas típicos de decaimiento progresivo y un avance paulatino de la enfermedad. Deben observarse árboles en distintos grados de decaimiento y muertes repartidas en el tiempo. Es habitual ver una progresión concéntrica o con una dirección preferencial aguas abajo. 3. Se dará preferencia a aquellos focos que presenten síntomas actualmente y se hubieran iniciado más temprano.                             4. Debido a los largos periodos de latencia de la enfermedad, y para evitar seleccionar árboles con infecciones latentes, no se considerarán aquellos focos cuyos primeros síntomas se hayan observado hace menos de 10 años.